FRET પેપ્ટાઇડ ટેકનોલોજી

ફ્લોરોસેન્સ રેઝોનન્સ એનર્જી ટ્રાન્સફર (FRET)

ફ્લોરોસેન્સ રેઝોનન્સ એનર્જી ટ્રાન્સફર (FRET) એ બિન-રેડિએટીવ એનર્જી ટ્રાન્સફર પ્રક્રિયા છે જેમાં ઇન્ટરમોલેક્યુલર ઇલેક્ટ્રિક કપલ્સની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા દ્વારા દાતા ઉત્તેજિત રાજ્ય ઊર્જા સ્વીકારનાર ઉત્સાહિત સ્થિતિમાં ટ્રાન્સફર થાય છે.આ પ્રક્રિયામાં ફોટોનનો સમાવેશ થતો નથી અને તેથી તે બિન-રેડિએટીવ છે.આ પરીક્ષા ઝડપી, સંવેદનશીલ અને સરળ હોવાના ફાયદા ધરાવે છે.

FRET પરીક્ષામાં વપરાતો રંગ સમાન હોઈ શકે છે.પરંતુ મોટા ભાગના કાર્યક્રમોમાં, વાસ્તવમાં વિવિધ રંગોનો ઉપયોગ થાય છે.સંક્ષિપ્તમાં, તેજસ્વી પ્રતિધ્વનિ ઊર્જાનું સ્થાનાંતરણ એ દાતા (ડાઇ 1) થી સ્વીકારનાર (ડાઇ 2) ને જ્યારે દાતા જૂથ ઉત્સાહિત હોય ત્યારે દ્વિધ્રુવોની જોડીનું ટ્રાન્સફર છે.સામાન્ય રીતે, ડોનર ફ્લોરોફોર જૂથનું ઉત્સર્જન સ્પેક્ટ્રમ સ્વીકારનાર જૂથના શોષણ સ્પેક્ટ્રમ સાથે ઓવરલેપ થાય છે."જ્યારે બે ફ્લોરોફોર્સ વચ્ચેનું અંતર યોગ્ય હોય (10 - 100 A), દાતા પાસેથી સ્વીકારનારને ફ્લોરોફોર ઊર્જાનું ટ્રાન્સફર અવલોકન કરી શકાય છે."ઊર્જા ટ્રાન્સફરની પદ્ધતિ રીસેપ્ટરની રાસાયણિક રચના પર આધારિત છે:

1. મોલેક્યુલર વાઇબ્રેશનમાં રૂપાંતરિત થાય છે, એટલે કે, ઊર્જા સ્થાનાંતરણનો તેજસ્વી પ્રકાશ અદૃશ્ય થઈ જાય છે.(રીસેપ્ટર પ્રકાશ શમન કરનાર છે)

2. ઉત્સર્જન રીસેપ્ટર કરતાં વધુ તીવ્ર હોય છે, જેના પરિણામે ગૌણ ફ્લોરોસેન્સ સ્પેક્ટ્રમમાં રેડ શિફ્ટ થાય છે.”(રીસેપ્ટર્સ તેજસ્વી ઉત્સર્જકો છે).

દાતા જૂથ (EDANS) અને સ્વીકારનાર જનીન (DABCYL) એચઆઈવી પ્રોટીઝના કુદરતી સબસ્ટ્રેટ સાથે સમાન રીતે જોડાયેલા છે, અને જ્યારે સબસ્ટ્રેટ ડિસ્કનેક્ટ ન થાય, ત્યારે DABCYL EDANS ને ક્વેનલ કરી શકે છે અને પછી ફ્લોરિન માટે શોધી ન શકાય તેવું બની શકે છે.એચ.આઈ.વી.-1 પ્રોટીઝ ડિસ્કનેક્શન પર, DABCYL દ્વારા EDANS ને શાંત કરવામાં આવતું નથી, અને EDANS લ્યુસિફેરેસ પછીથી શોધી શકાય છે.EDANS ની ફ્લોરોસેન્સ તીવ્રતામાં ફેરફાર દ્વારા પ્રોટીઝ અવરોધકોની ઉપલબ્ધતાનું નિરીક્ષણ કરી શકાય છે.

FRET પેપ્ટાઈડ્સ એ પેપ્ટીડેઝની બિન-વિશિષ્ટતાનો અભ્યાસ કરવા માટે અનુકૂળ સાધનો છે.કારણ કે તેની પ્રતિક્રિયા પ્રક્રિયાનું સતત નિરીક્ષણ કરી શકાય છે, તે એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિને શોધવા માટે અનુકૂળ પદ્ધતિ પ્રદાન કરે છે.દાતા/સ્વીકારકર્તા દ્વારા પેપ્ટાઇડ બોન્ડના હાઇડ્રોલિસિસ પછી ઉત્પાદિત ચમક નેનોમોલર સાંદ્રતા પર એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિનું માપ પૂરું પાડે છે.જ્યારે FRET પેપ્ટાઈડ અકબંધ હોય છે, ત્યારે તે આંતરિક ફ્લેશની અચાનક અદ્રશ્યતા દર્શાવે છે, પરંતુ જ્યારે દાતા/સ્વીકારકર્તાની વિરુદ્ધ કોઈપણ પેપ્ટાઈડ બોન્ડ તૂટી જાય છે, ત્યારે તે એક ફ્લેશ પ્રકાશિત કરે છે, જે સતત શોધી શકાય છે અને પછી એન્ઝાઇમની પ્રવૃત્તિને માપી શકાય છે.